Главная страница

Общая_микробиологи_учеб._пособие. Учебно-методическое пособие Новосибирск 2016


Скачать 1.43 Mb.
НазваниеУчебно-методическое пособие Новосибирск 2016
АнкорОбщая_микробиологи_учеб._пособие.pdf
Дата09.06.2017
Размер1.43 Mb.
Формат файлаpdf
Имя файлаObschaya_mikrobiologi_ucheb_posobie.pdf
оригинальный pdf просмотр
ТипУчебно-методическое пособие
#22201
страница1 из 9
Каталог

С этим файлом связано 42168 файл(ов). Среди них: lekcii_po_gigiene.doc, Ftiziatria_zadachi.doc, Kak_pravilno_prisedat_Polnoe_rukovodstvo.pdf, Kak_dostich_svoego_potentsiala_v_prisedaniakh_Chast_2.pdf, Kak_dostich_svoego_potentsiala_v_prisedaniakh_Chast_1.pdf, 20_prichin_chtoby_prisedat_prisedat_i_esche_raz_prisedat.pdf, Огоньки(знакомства,конфликтные,адаптации итд).doc, vasileva_okruzhayuschiy_mir.docx, ИГРЫ-УПРАЖНЕНИЯ, ТРЕНИРУЮЩИЕ КООРДИНАЦИЮ ДВИЖЕНИЙ, ЛОВКОСТЬ, РЕА и ещё 42158 файл(а).
Показать все связанные файлы
  1   2   3   4   5   6   7   8   9
Общая микробиология
Учебно-методическое пособие Новосибирск 2016

2 Новосибирский государственный аграрный университет
Биолого-технологический факультет Общая микробиология
Учебно-методическое пособие Новосибирск 2016

3
УДК 579 (075)
ББК 28.4 О – 281 Кафедра экологии Составитель канд. биол. наук, проф. Л.А. Литвина Под общей редакцией д-ра биол. наук, проф. А.Г. Незавитина Рецензент канд. биол. наук, проф. ИВ. Тюньков Общая микробиология учеб.-метод. пособие / Новосиб. гос. агр. унт.
Биол.-технол. фак. ИЗОП; сост. Л.А. Литвина. – Новосибирск Изд-во НГАУ,
2016. – 92 с.
Учебно-методическое пособие предназначено для студентов, обучающихся по направлениям подготовки 06.03.01 Биология, 27.03.01 Стандартизация и метрология, 19.03.03 Продукты питания животного происхождения,
19.03.04 Технология продукции и организация общественного питания,
38.03.07 Товароведение, 36.03.02 Зоотехния, 35.03.07 Технология производства и переработки сельскохозяйственной продукции очной и заочной формы обучения. Данное пособие может быть использовано на лабораторно- практических занятиях по дисциплинам микробиологического направления. Предназначено для лабораторно-практических занятий и самостоятельной подготовки студентов биолого-технологического факультета очной и заочной форм обучения по освоению курса общей микробиологии. Утверждено учебно-методическим советом биолого-технологического факультета (протокол №1 от 27 января 2016 г.

Новосибирский государственный аграрный университет, 2016

4 ВВЕДЕНИЕ Уважаемые студенты Вы пришли в лабораторию микробиологии. Здесь вы познакомитесь с чрезвычайно интересным, но необычным миром – миром микробов. Необычность его состоит не только в том, что он невидим невооруженным глазом, а в том, что он вообще не воспринимается ни одним из наших органов чувств. Поэтому для изучения микроорганизмов пользуются нестандартными методами, освоение которых представляет определенные трудности. Будьте к этому готовы и не огорчайтесь, если с первого раза ваша работа не будет слишком успешной. Систематические занятия и помощь преподавателя обеспечат выполнение вами всего объема необходимых исследований. Знакомство с микробиологией – наукой о жизни малых существ – для студентов биолого-технологического факультета состоится в лаборатории микробиологии при изучении разделов Общая микробиология для всех направлений и Специальная микробиология для каждого направления специальности. При изучении общей микробиологии студенты сначала знакомятся с правилами работы в микробиологических лабораториях, а затем осваивают методы исследования морфологии и физиологии микроорганизмов, которыми пользуются все микробиологи – ветеринарные, медицинские и др. Результаты микробиологических исследований и опытов, сделанных в лаборатории, студенты заносят в рабочие тетради, которые помогают продолжить работу поданным темам во внеаудиторное время. Перечень контрольных вопросов и литература для подготовки к занятию даны в конце каждой темы. Сведения, полученные студентами на занятиях по общей микробиологии, способствуют развитию представления о многообразии мира микробов, об универсальности клетки как единицы всей живой материи и о роли микроорганизмов в жизни нашей планеты. Для специалистов-технологов создается база для усвоения специальной микробиологии, где рассматриваются технически значимая микрофлора, а также микроорганизмы, вызывающие порчу продукции. Для специальностей Технология мяса и мясных продуктов, Товароведение и экспертиза товаров, Технология продуктов питания и общепита изучение общей микробиологии способствует дальнейшему пониманию вопросов, связанных с передачей микроорганизмов, возбудителей инфекционных заболеваний, через животноводческую продукцию человеку, что может вызвать его заболевание. В результате изучения общей микробиологии студенты должны овладеть техникой микроскопирования и приготовления мазков препаратов, а также различными методами их окрашивания. Эти навыки будут использованы при изучении качества мяса и молочных продуктов, а также при изучении микрофлоры почвы, воды, воздуха и др.

5 В конце данного пособия приведен краткий словарь микробиологических терминов и понятий, пользуясь которым, студенты могут узнать точное толкование того или иного термина, его дословный перевод с латинского или греческого языков. Кроме того, в этом разделе приведены сведения о систематике микроорганизмов, что позволит ознакомиться с современным представлением о распределении микроорганизмов между отделами, основанным на разнице в строении и составе клеточной стенки бактерий. Общая трудоемкость дисциплин Микробиология для специальности Технология производства и переработки сельскохозяйственной продукции – 90 ч, из них аудиторные занятия, лекции – 22, лабораторные работы – 18, самостоятельная работа –
50 ч. Биология и микробиология для специальности Технология мяса и мясных продуктов – 72 ч, из них аудиторные занятия – 30, лекции – 16, лабораторные работы – 14, самостоятельная работа – 42 ч. Основы микробиологии для специальности Товароведение и экспертиза товаров – 100 ч, из них аудиторные занятия – 50, лекции – 24, лабораторные работы – 26, самостоятельная работа – 60 ч. Микробиологии для специальности Технология продуктов питания и общепита – 102 ч, из них аудиторные занятия – 50, лекции – 26, лабораторные работы – 24, самостоятельная работа – 52 ч. Микробиология для специальности Стандартизация и сертификация ч, из них аудиторные занятия – 42, лекции – 22, лабораторные работы, самостоятельная работа – 48 ч. Микробиология для специальности Биология –- 3 зач. ед, из них аудиторные занятия – 108 ч, лекции – 20, лабораторные работы – 34, самостоятельная работа – 54 ч. В процессе занятий выполняется одна контрольная работа. По завершении курса сдается экзамен.

6
1. ОРГАНИЗАЦИЯ, ОБОРУДОВАНИЕ И ПРАВИЛА РАБОТЫ В УЧЕБНОЙ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРИИ План Правила работы в микробиологической лаборатории. Оборудование учебной микробиологической лаборатории.
3. Оборудование рабочего стола.
4. Техника работы с бактериологической петлёй, пробиркой, спиртовкой.
5. Организация работы бактериологической лаборатории по исследованию продовольственного сырья и продуктов.
6. Классификация патогенности микроорганизмов, действующая на территории Российской Федерации. Классификация патогенности микроорганизмов Всемирной Организации Здравоохранения.
1.1. Правила работы в микробиологической лаборатории По своему назначению микробиологические лаборатории могут быть диагностическими, научно-исследовательскими (в которых выявляются возбудители заболеваний животных и человека, контрольными (на мясокомбинатах, молочных, хлебных, пивоваренных, дрожжевых заводах) и учебными. В условиях учебной микробиологической лаборатории студенты обычно знакомятся с сапрофитными микроорганизмами, те. не патогенными для человека. Но следует иметь ввиду, что при посеве различного материала на питательные среды могут быть выявлены патогенные формы. В связи с этим правила работы в микробиологическом практикуме университета являются общими с правилами работы в любой другой бактериологической лаборатории и сводятся в основном к следующему Работать в лаборатории следует в халате и шапочке на постоянно закрепленном за студентом месте. На рабочем месте должно быть установлено только оборудование и не должно находиться ничего лишнего. Вовремя работы необходимо соблюдать опрятность и чистоту, не допуская разлива и разбрызгивания культур. При работе со спиртовкой зажигать ее только с помощью спичек. Гасить спиртовку следует только колпачком, который завертывают на горловине спиртовки после окончания работы. В помещении лаборатории нельзя принимать пищу, пить воду, допускать излишние разговоры, а при пользовании пипетками брать их в рот. Использованные предметные и покровные стекла, шпатели помещают в сосуд с дезинфицирующим раствором (й раствор фенола или й раствор хлорамина. Пинцеты, бактериологические петли и другие металлические предметы перед тем, как использовать или поставить на место, необходимо прожечь в пламени спиртовки.

7 Чашки Петри и пробирки, засеянные культурами микроорганизмов, ставят в термостат, предварительно написав на них восковым карандашом фамилию исследователя, номер группы и дату посева. При случайном попадании культуры микроорганизмов на предметы или одежду последние необходимо продезинфицировать м раствором фенола с помощью ваты и пинцета. Вату после обработки опустить в сосуд с дезинфицирующим раствором, который находится на лабораторном столе. После окончания работы необходимо навести порядок на своем столе, микроскоп закрыть чехлом, халат и шапочку убрать в полиэтиленовый пакета руки тщательно вымыть с мылом. Перед уходом из лаборатории необходимо сдать свой стол дежурному студенту, который сдает аудиторию дежурному лаборанту.
1.2. Оборудование учебной микробиологической лаборатории Наличие определенного оборудования в лаборатории диктуется исследованиями, проводимыми в ней.
Термостат – прибор, в котором автоматически поддерживается постоянная температура (рис. Он необходим для культивирования микроорганизмов, так как они не имеют механизмов, регулирующих собственную температуру, и принимают ее из окружающей среды.
К ул ь т ив и ров ан и е – выращивание микроорганизмов на питательных средах при заданной температуре в условиях лаборатории. Микроорганизмы тела животного и человека хорошо развиваются при температуре Си считаются м е з о фил а ми (от греч. мезо средний, фило – люблю, поэтому при их культивировании в термостате устанавливают именно такую температуру. К мезофилам относятся и патогенные для теплокровных микроорганизмы. Температура развития 25 – 39 СТ ер м о фил ы (от греч. термо тепло) развиваются при более высоких температурах (С. При выращивании их в термостате устанавливают температуру в этих пределах. Термофилы широко распространены в природе и участвуют в процессах самонагревания зерна, сена, навоза. Псих ро фил ы
(от греч. психрос холод) хорошо растут при низких температурах (+15… -8 С. К ним относят почвенные и морские микроорганизмы, а также вызывающие болезни рыб и водных растений. Психрофилы выращивают без термостата. Культивирование микроорганизмов осуществляется в основном в обычных условиях, те. при доступе кислорода. Микроорганизмы, растущие Рис. Термостат

8 при доступе кислорода и использующие его для окисления органических веществ с освобождением из них энергии, называются аэробами. Часть микроорганизмов относится кана эр оба мот греч. ан – отриц., аэр – воздух. Кислород для анаэробов оказывается даже токсичным, так как образующаяся при доступе кислорода перекись водорода (НО) ядовита для клеток, а расщепляющего ее фермента – каталазы – у анаэробов нет. Предложены различные методы культивирования анаэробов, одним из которых является выращивание анаэробов в анаэростате.
Анаэростат от др.-греч. ἀν- — отрицательная частица, др.-греч. ἀήρ
— воздух и στατός — стоящий, неподвижный) — прибор, предназначенный для культивирования в чашках Петри микроорганизмов группы облигатных анаэробов и микроаэрофилов (рис. Толстостенный металлический прибор, из которого можно с помощью вакуумного насоса откачать воздух. Степень откачивания определяется по манометру. Внутрь прибора помещают чашки Петри или пробирки с посевами, откачивают воздух до
0,5-0,8 атм, разъединяют с насосом и ставят втер- мостат при нужной температуре. Вмещает до 14 чашек. Стерилизация один из важнейших и необходимых приемов в микробиологической практике. В переводе с латинского термин обозначает обеспложивание, а в микробиологии – уничтожение микроорганизмов и их спор. Микробиология стерилизует питательные среды, на которых культивируются микроорганизмы, стеклянную посуду, инструменты для того, чтобы избежать попадания посторонних микроорганизмов. Для стерилизации используют автоклавы, аппарат Коха и другие приборы. Автоклав –
прибор, предназначенный для прогревания стерилизуемо- го объекта насыщенным паром при давлении выше атмосферного. Это массивный двустенный котел, между стенками которого наливают воду рис. Внутренняя часть котла представляет собой камеру, в которую помещают стерилизуемый материал и куда поступает пар от нагреваемой воды. Автоклав герметически закрывается массивной крышкой. Давление, создающееся в стерилизационной камере, определяют по манометру. Нормальное атмосферное давление (760 мм рт. ст) принимают за нуль, а давление в 1 атм на манометре соответствует 1 атм сверх нормального. Автоклав выдерживает давление до 3 атм, при этом температура Рис. Анаэростат Рис. 3. Автоклав

9 кипения будет С. Режим работы автоклава может быть различным в зависимости от стерилизуемого объекта. Например, 0,7 атм при температуре С, время стерилизации 30 мин для питательных сред 1 атм при температуре С, время стерилизации 1 ч для перевязочного материала 1,5 атм при температуре С, время стерилизации 2 ч – для объектов, загрязненных спорами микроорганизмов. В целях безопасности автоклав ставят в отдельном помещении, работают с ним специально обученные люди. Современные автоклавы (паровые стерилизаторы различной конструкции) более безопасны, работают в полуавтоматическом режиме
(рис.4).
В комплект поставки входит парогаси- тель. Возможна установка программируемого режима стерилизации, например температура стерилизации от+ 1 до 134+ 2 С, время стерилизации от 5 домин, время сушки от 0 домин. Стерилизаторы снабжены системой вакуумной сушки, часами, счетчиками циклов, системой аварийной установки. Эти стерилизаторы соответствуют европейским стандартам качества. При стерилизации некоторых питательных сред возникает необходимость в их мягкой обработке, те. в такой, при которой температура и давление не разрушают питательные компоненты среды – молоко, желатин, углеводы. Для этого используют вместо автоклавов стерилизацию текучим паром, осуществляемую в аппарате Коха. Аппарат Коха
высокий двустенный металлический цилиндр, на дно которого наливается вода (рис. Над водой расположена сетка, на которую устанавливают стерилизуемые среды. Аппарат ставят на плитку (в некоторых аппарат в дно уже вмонтирован нагреватель, который включают в сеть, и доводят воду до кипения. Образующийся пар проходит снизу вверх через стерилизуемый объект и выходит через отверстия в крышке аппарата, те. как бы течет. Кохирование проводят три раза с интервалом в сутки. За время, проходящее между кохированием, обрабатываемые среды или растворы ставят в термостат для проращивания спор споровые формы превращаются в вегетативные и погибают при последующем нагревании до Св течение 30 мин. Стерилизация высокой температурой может осуществляться и без помощи пара – в специальных печах Пастера или сушильных шкафах. Сушильный шкаф – металлический шкаф с двойными стенками и хорошей теплоизоляцией, где температура может подниматься до С (рис. Такой температуры достаточно, чтобы в течение 1,5 Рис. 4. Паровой стерилизатор автоклав) Рис. 5. Аппарат Коха

10 ч произошла стерилизация объектов. В сушильных шкафах стерилизуют вату, марлю, чистую сухую стеклянную посуду, пипетки. Все должно быть завернуто в бумагу, так как иначе посуда, вынутая из шкафа, при соприкосновении с воздухом перестанет быть стерильной. Питательные среды, используемые для культивирования микроорганизмов, стерилизуют либо в аппарате
Коха, либо в автоклаве. Водяная баня – прибор, в котором происходит равномерное и постепенное нагревание питательной среды, исключающее ее пригорание, так как расплавление идет медленно (рис. Можно использовать водяную баню и для дробной стерилизации питательных сред, содержащих легко разрушающиеся вещества витамины, белок, яйца и пр. В водяной бане можно нагревать объекты до С многократно, с интервалом в сутки. Эффект стерилизации тот же, что и при кохировании, только при более щадящем действии температуры. Такой метод носит название тиндализация. Как правило, плотные при обычной температуре питательные среды необходимо разлить в колбы или флаконы емкостью 200-300 мл. Для розлива сред в пробирки и чашки Петри, в которых культивируются микроорганизмы, необходимо предварительно расплавить питательную среду, а затем разлить ее по несколько миллилитров в чашки и пробирки. Для расплавления среды используют водяную баню, где разогрев происходит медленно и постепенно. Музей культур. В каждой микробиологической лаборатории есть как правило, свой музей культур, те. микроорганизмов, виды которых совершенно четко определены, известны их культурально-биохимические свойства. Чтобы избежать загрязнения культур посторонними микроорганизмами, их стараются реже трогать и хранят длительное время в холодильниках при С, те. в условиях, когда процессы жизнедеятельности доведены до минимума. Холодильник – необходимый для лаборатории бытовой прибор, в котором в специальных картонных тубусах хранят музейные культуры. Тубусы предохраняют культуры от высыхания. Настольный бокс (от англ. box – коробка, ящик) – небольшое замкнутое пространство, которое обрабатывают дезинфицирующими средствами, а воздух в нем стерилизуют бактерицидной лампой. Бокс необходим для рабо-
Рис. 6. Сушильный шкаф Рис. Водяная баня

11 тыс музейными культурами, для их пересева, т.к. для этого должны быть созданы определенные условия, обеспечивающие стерильность. Внутри бокса при работе находится еще и зажженная спиртовка. Культуры микроорганизмов и руки микробиолога как бы изолированы от внешнего мира. Сам исследователь находится вне бокса, что выгодно отличает настольный бокс от боксовой комнаты, в условиях которой должен находиться сам человек.
Современные боксы микробиологической безопасности
II класса обеспечивают защиту продукта, оператора и окружающей среды от микробиологической контаминации. Область применения таких боксов – микробиология и вирусология, в том числе работы с возбудителями заболеваний человека и животных, гематология, работы с клеточными культурами и рекомбинантной ДНК. Ламинарный микробиологический бокс является установкой, предназначенной для работы с опасными биологическими объектами (рис. 8). Данный бокс представляет собой ограниченное рабочее место с собственной фильтрацией, циркуляцией воздуха и направленным потоком воздуха, обеспечивающим охрану продукта и оператора от контаминации продуктом. Бокс содержит собственную циркуляционную установку с вентилятором. Вертикальный поток воздуха подается к рабочей поверхности с помощью вентилятора через HEPA фильтр № 1 внутри циркуляционной установки и распределитель.
Подсос воздуха из внешнего пространства производится через отверстие между откидным окном и рабочей поверхностью. Отвод воздуха в окружающую среду осуществляется через HEPA фильтр № 2 в потолке установки. Внутреннее пространство над рабочей поверхностью выполнено с освещением. Поверхность образована тремя съемными перфорированными решетками из нержавеющей стали, которые установлены на ванне из нержавеющей стали. При необходимости подключения к энергоносителям подведение осуществляется в рабочее пространство сбоку. Лабораторные вентили устанавливаются, в зависимости от пожеланий, на левой или правой боковых стенках. Для проведения несложной уборки и манипуляции во внутреннем пространстве бокс оснащен откидным окном, которое в открытом положении защищено от самопроизвольного закрытия с помощью пневматических пружин. Внутреннее пространство дезинфицируют с помощью специальных аэрозолей. Бактерицидная лампа предназначена для стерилизации воздуха лаборатории ультрафиолетовыми лучами. Они вызывают гибель вегетативных клеток и спор микроорганизмов. Лампы бывают различных марок (БУФ, БУФ, но особенностью всех их является способность испускать линейчатый спектр в ультрафиолетовой области, более 80% энергии которого прихо-
Рис.8. Ламинарный бокс

12 дится на длину волны 2537 А, те. самую эффективную для поглощения нуклеиновыми кислотами бактерий и их гибели. Стекло лампы пропускает все эти лучи, задерживая только те, длина которых короче 2000 А. Длительность облучения воздуха должна быть не менее 2 ч, так как при недостаточном действии УФ-лучи могут вызвать мутации у микроорганизмов, а не их гибель. Находиться в помещении при включенной лампе нельзя, так как УФ - лучи вызывают острое воспаление роговицы глаз. Наиболее эффективным является воздействие ультрафиолетового излучения на микроорганизмы, которые располагаются одним слоем. В микробиологической лаборатории работа ведется с большим количеством микроорганизмов, поэтому даже при самом аккуратном обращении неизбежно их попадание в воздух. Наличие микроорганизмов в воздухе вредно для человека, а также может служить причиной попадания посторонней микрофлоры в исследуемые культуры. Поэтому в конце рабочего дня в лаборатории включают бактерицидную лампу.
  1   2   3   4   5   6   7   8   9

перейти в каталог файлов
связь с админом